Anales de la Real Academia Nacional de Farmacia, Vol 73, No 2 (2007)

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Las determinaciones de glutamato utilizando Amplex Red Glutamic Acid Assay están afectadas por el agonista P2X BzATP

Patricia Marín García, Jesús Sánchez Nogueiro, David León

Resumen


El compuesto Amplex Red (AR) es el sustrato fluorogénico para la peroxidasa de rábano (HRP) más estable y sensible. Así, en presencia de peróxido de hidrógeno (H2O2), el AR (un compuesto no fluorescente) es convertido en resorufina (un producto fuertemente fluorescente) por la acción de la HRP. En los últimos años se han realizado muchos ensayos utilizando este compuesto para cuantificar un variado surtido de análisis, así como para detectar la actividad de muchas y variadas enzimas. Recientemente hemos demostrado que el BzATP, un agonista de varios receptores ionotrópicos de nucleótidos (P2X), interfiere con la oxidación del Amplex Red catalizada por la HRP. En el presente trabajo mostramos que las determinaciones de glutamato utilizando el kit Amplex Red Glutamic Acid/Glutamate Oxidase Assay están fuertemente interferidas por el BzATP. Estos datos son realmente interesantes porque demuestran que la fluorescencia de la resorufina, en presencia del BzATP, no es proporcional a la concentración de glutamato y, por lo tanto, no debe ser utilizada como un método para medir la concentración de glutamato.




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